丝状真菌蛋白提取试剂盒

丝状真菌蛋白提取试剂盒

HYYBB93-50T

丝状真菌蛋白提取试剂盒注意事项： 

● 本试剂盒仅供科学研究使用。（不可用于诊断或治疗用途，不可用于食品或化妆品用途）

● 正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。

● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

● 使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒储存条件:

2-8℃保存。

【注】:

试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。

拆封后请尽快使用完!

丝状真菌蛋白提取试剂盒产品组成：

各组份储存条件:

蛋白提取液 2-8℃保存;

蛋白酶抑制剂-20℃保存。

【注】:

蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以 2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

蛋白酶抑制剂在 2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或 37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

试剂拆封后请尽快使用完!

产品简介：

华越洋丝状真菌蛋白提取试剂盒适用于从各种丝状真菌中提取总蛋白。优化的裂解液配方可以充分释放各种有隔膜菌丝和无隔膜菌丝蛋白以及各种菌丝变态体蛋白，提取过程简单方便，可在1小时内完成。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于 Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift 凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有 EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用华越洋其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于 2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

丝状真菌蛋白提取试剂盒

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材

● 离心机          ●振荡器

● 匀浆机/匀浆器   ● 移液器、冰箱、冰盒     

● 涡旋混匀器        ● 离心管、吸头、一次性手套

● PBS缓冲液(p H7.4,实验室常用的10 mM磷酸缓冲盐溶液(1X））

(phosphate buffer saline/Dulbecco's PBS: 约含8mM NazHPO4、2mMKH2PO4、137mM NaCl和3mM KCI)

●蛋白定量试剂盒

丝状真菌蛋白提取试剂使用方法：

使用注意事项：

旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体酒落。

实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1.提取液制备:

每 500ul 丝状真菌蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。

【注】:

根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

2.收集丝状真菌样本，用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

3.将菌体置于研钵中用液氮研磨至粉末。

【注】:

若无液氮研磨条件，可直接用蛋白提取液研磨。

无液氮研磨条件，也可用匀浆器/匀浆机充分匀浆。

●若样本较少，不好研磨操作，直接进行下面的步骤

4.每 50-100mg 菌体中加入 300u1-500ul蛋白提取液,混匀后,在 2-8℃条件下振荡 20-40 分钟。

【注】:

使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

5.在 4℃，12000-14000xg条件下离心 10 分钟。

6.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到真菌总蛋白。

7.将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】:建议用 BCA法进行蛋白定量。

蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析:

蛋白浓度低？

处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。有些蛋白含量低的样本需要尽可能增加真菌样本的上样量。

用什么方法定量蛋白?

建议用 BCA 法。不适合用 Bradford 法，因为试剂A中含有干扰 Bradford 法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford 法定量。

提取的蛋白具有活性吗?

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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6：无核酸酶，无热原耗材：吸头，离心管，PCR管等RNA实验直接使用，不需任何处理。