DNA消化试剂盒(DNase I)

DNA消化试剂盒(DNase I)

HYYADB93

RNase free DNase I  0.5 ml

10× DNase Buffer  1 ml

EDTA Stopper     0.5 ml

产品组成、储存、浓度：-20℃ 保存 1 年。浓度：3U/μl

制品说明：

DNase I，即 Deoxyribonuclease I，中文名称为脱氧核糖核酸酶 I，是一种可以消化单链或双链 DNA 产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I 水解单链或双链 DNA 后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。DNase I 活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNaseI 可随机剪切双链 DNA 的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I 可在同一位点剪切 DNA 双链，形成平末端，或 1-2 个核苷酸突出的粘末端。

产品特点：

本产品使用本公司特有的 DNase 和独特的反应液消化后不需要繁琐的苯酚/氯仿抽提灭活，可直接用于反转录反应，使用起来非常快速，方便。

活性单位：37℃10 分钟内，将能够完全降解 1μg pBR322 质粒 DNA 所需的酶量定义为 1 个活性单位。

来源：大肠杆菌表达的 31kd 重组蛋白 。

酶贮存缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5)，10 mM CaCl2，50% (v/v)glycerol。

10×DNase Buffer：100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃)，25 mM MgCl2，1 mM CaCl2。

纯度：不含其它 DNA 内切酶和外切酶，不含 RNA 酶。适用范围：

制备不含 DNA 的 RNA 样品； RT-PCR 反应前 RNA 样品中去除基因组 DNA 等可能的 DNA 污染； 体外 T7, T3,SP6 等 RNAPolymerases 催化的 RNA 转录后去除 DNA 模板；DNase I footprinting 研究 DNA-蛋白质相互作用；缺口平移(nick translatioin)；产生 DNA 随机片断文库；细胞凋亡 TUNEL 检测中部分剪切基因组 DNA 作为阳性对照。

反应体系与条件：

1.在 RNAse free 管里面加入以下成分

RNA < 3μg (< 8μl)

10×DNase Buffer      1μl

DNase I               1μl

RNAse free water Up to 10μl

2. 37℃孵育 30 分钟。

3. 加 1μl EDTA Stopper。

4. 65℃孵育 10 分钟，灭活 DNase I。

4. 取适量或者全部 10μl 的处理过的 RNA 直接用于反转录。

注意事项：

每μl DNase I 最多处理不超过 3μg RNA。 如果需要 RNA 较多，需要根据 RNA 的处理量按比例放大 DNase I、10×DNase Buffer 使用量和反应体积。如果处理后需要得到纯净 RNA，可以使用 RNAclean RNA 清洁纯化试剂盒（在第 2 步后（37℃孵育 30 分钟后）直接清洁纯化（不需要加 EDTA Stopper 和 65℃孵育 10分钟的步骤了）。